Среда левина-грм оболенск. Питательная среда с эозин-метиленовым синим для выделения и дифференциации энтеробактерий (Среда Левина) Плотность готовой среды

Посевы исследуемых образцов инкубировать 18-48 ч при температуре 37°С Контроль роста визуальный – по наличию или отсутствию и внешнему виду колоний. Лактозоположительные микроорганизмы образуют непрозрачные колонии от светло-сиреневого до фиолетового цвета с металлическим блеском или без него. Лактозоотрицательные микроорганизмы образуют прозрачные или полупрозрачные бесцветные колонии (могут образовывать колонии бледно-розового цвета).

Хранение - в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2оС до 25оС. Замораживание не допускается.
Транспортирование - при температуре от 2оС до 25оС. Замораживание не допускается.

— питательная среда для выделения, подсчета и различия грамотрицательных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae.

Состав

В состав среды входят:

• пептон
• Калия фосфат
• лактоза
• Эозин Y
• Метиленовый синий
• Агар-агар

Среда имеет pH около 7 и сохраняется в темноте. Готовая среда имеет красновато-сиреневое окраски, неопалесцирующий с зеленоватым оттенком и легким преципитатом, если в чашках Петри формируется гель.

Назначение и принцип действия

Эта среда разработана американским микробиологом Левином (Levine) и используются для дифференциации Escherichia coli и Enterobacter aerogenes, а также для быстрой идентификации грибов Candida albicans. Американские микробиологи рекомендуют это среда для выделения, подсчета и розрзнення грамотрицательных микроорганизмов кишечной (колиформные) группы. Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Эти красители служат в качестве индикаторов расщепления лактозы. На этой среде могут расти в виде точечных колоний дрожжи и некоторые грам-положительные бактерии, например, энтерококки.

Микробиолог Велд (Weld) предложил использовать агар Левина с добавлением хлор-тетрациклина гидрохлорида для быстрой идентификации грибов Candida albicans в клиническом материале. Выявление этих грибов в таком материале, как фекалии, оральный и вагинальный секрет, ногти, чешуйки кожи и другое возможно через 24-48 часов при инкубации при 35-37 ° С в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа. Однако культуральные свойства грибов при этом варьируют.

Культуральные свойства

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37 ° С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост

Escherichia coli (25922) Обильный

Pseudomonas aeruginosa (27853) Обильный

Salmonella typhimurium (14028) Обильный

Candida albicans (10231) Хороший или обильный (в атмосфере с 10% углекислого газа)

Enterobacter aerogenes (13048) Хороший

Staphylococcus aureus (25923) Слабый или отсутствует

Saccharomyces cerevisiae (9763) Слабый или отсутствует

Enterococcus faecalis (29212) Подавляется

Левина-ГРМ Оболенск Питательная среда с эозин-метиленовым синим для выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков, сухая.

Цена за упаковку 0,25 кг

ИНСТРУКЦИЯ по применению питательной среды с эозин-метиленовым синим сухой — Среда Левина-ГРМ Оболенск

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Среда Левина-ГРМ Оболенск предназначена для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков.

1. характеристика

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-сиреневого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Наличие в среде эозина и метиленового синего придают ей селективные свойства.

Дифференцирующая способность среды основана на изменении рН среды под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы. Комплекс индикаторов в кислой зоне окрашивает колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет, некоторые колонии имеют зеленоватый металлический блеск.

2.2. СОСТАВ

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Среда Левина-ГРМ должна обеспечивать на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов Shigella flexneri 1a 8516 и Escherichia coli 168/59 (O111:K58) через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры каждого тест-штамма из разведения 10 -7 , и рост тест-штамма Staphylococcus aureus 209-P (АТСС 6538-Р) через 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры тест-штамма из разведения 10 -5 .

Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда должна обеспечивать чёткую дифференциацию шигелл от эшерихий на всех засеянных чашках при посеве по 0,1 мл микробной смеси S. flexneri 1a 8516 и E. coli 168/59 (O111:K58) из разведения 10 -6 (в соотношении 1:1) через 18- 20 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Потенциальный риск применения питательной среды в соответствии с Приказом
МЗ РФ №4н от 06.6.2012 — класс 2 а.

1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

• Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
• Весы лабораторные 2 класса точности
• Автоклав
• Пробирки стеклянные
• Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
• Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
• Чашки Петри стерильные
• Вода дистиллированная
• Колбы
• Воронки стеклянные

1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в клинической лабораторной диагностике (кровь, желчь, моча, гной и т.д.).

1. Проведение АНАЛИЗа

Исследование проводят в условиях бактериологической лаборатории медицинскими специалистами.

7.1. Приготовление среды Левина-ГРМ Оболенск.

Порошок в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 20 мин. Стерильную среду охлаждают до температуры
45-50 °С, разливают в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушивают при температуре (37±1)°С в течение 40-60 мин. Готовая среда в чашках Петри прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.

Стерильную среду можно использовать в течение 3-х дней при условии ее хранения при температуре 2-8 C.

7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с “Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями” (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений”.

7.3. Исследуемый материал стерильным шпателем тщательно втирают по всей поверхности среды. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 46-48 ч.

1. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С визуально учитывают характер роста культур S. flexneri 1a 8516 и E.coli 168/59 (O111:K58) и через 46-48 ч характер роста культуры S.aureus 209-P (АТСС 6538-Р).

Колонии S.flexneri 1a 8516 должны быть круглыми, прозрачными, бесцветными или слабо-розовыми, диаметром 1,0-1,5 мм.

Колонии E.coli 168/59 (O111:K58) должны быть круглыми, темно-фиолетового цвета с зеленым металлическим блеском (возможно наличие отдельных колоний без металлического блеска), диаметром 1,5-2,0 мм.

Колонии S. aureus 209-P (АТСС 6538-Р) должны быть круглыми, бесцветными или светло-фиолетовыми с темным центром, диаметром до 1,0 мм.

1. УТИЛИЗАЦИЯ

Утилизация серий среды Левина-ГРМ Оболенск с истекшим сроком годности производится по
СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «А» — эпидемиологически безопасные отходы.

Уничтожение среды Левина-ГРМ после проведения биологического контроля осуществляется по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре (133±1) ˚С.

Обращение с медицинскими отходами следует выполнять согласно схеме, принятой в конкретной организации, осуществляющей медицинскую и (или) фармацевтическую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями вышеуказанных санитарных правил и утверждается руководителем организации.

1. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

ЛЕВИНА СРЕДА (M. Levine, амер. бактериолог, род. в 1889 г.; син. агар с эозином и метиленовым синим ) - цветная элективная питательная среда для дифференцирования бактерий сем. Enterobacteriaсеае, используется при лабораторной диагностике дизентерии, брюшного тифа, сальмонеллезов и других кишечных инфекций. Впервые агар с эозином и метиленовым синим был предложен в 1916 г. Холт-Харрисом и Тигом (J. E. Holt-Harris, О. Teague), позднее, в 1918 г., состав среды был модифицирован Левином.

Л. с. наряду с другими твердыми цветными дифференциально-диагностическими питательными средами для энтеробактерий нашла широкое применение в лаб. практике. С ее помощью удается в сравнительно большом проценте случаев обнаружить патогенную лактозонегативную микрофлору. Готовая Л. с. довольно стабильна, не изменяет своих свойств на свету или при хранении на протяжении нескольких дней; при ее изготовлении не требуется точного установления концентрации водородных ионов (pH). Входящие в состав Л. с. органические красители избирательно задерживают рост грамположительных бактерий, благодаря чему она одновременно является средой обогащения и дает относительно лучшие результаты при непосредственном посеве исследуемого материала, даже если он содержит сравнительно малое количество патогенных бактерий.

В зависимости от качества отдельных ингредиентов (пептона и в особенности красителей) получаемые на Л. с. результаты могут несколько варьировать, поэтому при изготовлении каждой новой серии среды желательно использование материалов одной и той же марки, что значительно облегчает распознавание колоний.

Известно несколько прописей и способов приготовления Л. с. (Ю. А. Козлов, Г. Я. Синай, О. Г. Биргер и др.). Наибольшее распространение получил способ, при к-ром раздельно готовят основную среду, р-ры лактозы и красителей, пригодные для сохранения впрок и смешиваемые перед употреблением.

Основная среда состоит из 10 г бактериологического пептона, 15 г агар-агара, 2 г фосфата калия двузамещенного (K2HPO4) и 1 л дистиллированной воды. Ее стерилизуют в автоклаве при 1 ат 15-20 мин., pH не исправляют.

При приготовлении дифференциальной среды на каждые 100 мл расплавленной основной среды при постоянном помешивании добавляют приготовленные на дистиллированной воде и предварительно простерилизованные текучим паром (дробно, 3 дня подряд по 15-20 мин.) следующие р-ры в приведенной последовательности 5 мл 20% р-ра медицинской лактозы, 2 мл 2% р-ра эозина щелочного (бактериологического), 1,5 мл 0,5% р-ра метиленового синего. Готовую среду разливают в чашки Петри, слегка подсушивают и используют как обычно. Цвет среды сине-фиолетовый.

Колонии кишечной палочки на Л. с. небольшие, округлые, с гладкой блестящей поверхностью, темно-синего (до черного) цвета, иногда с металлическим блеском. Молодые колонии мутноватые, непрозрачные, могут быть окрашены только в центре. Колонии возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов относительно более мелкие, круглые, блестящие и прозрачные, обычно совершенно бесцветные (молодые) или с легким розоватым или голубоватым оттенком. Колонии протея ползучего роста не дают; они небольшие, изолированные, оранжево-желтого цвета. Среда меняет свой цвет только вокруг колоний протея.

Некоторые авторы рекомендуют увеличивать количество 0,5% р-ра метиленового синего до 2 мл на 100 мл основной среды или исключать из ее состава фосфатный буфер. Можно готовить среду не с пептоном, а на основе перевара Хоттингера, при pH 7,2-7,3 с добавлением соответствующего прописи количества агара и фосфорнокислого калия. Применение мясной воды для приготовления среды недопустимо, дифференциация колоний в этом случае значительно ухудшается.

Известен способ приготовления сухой Л. с., очень стабильной по качеству и особенно удобной для длительного хранения и в условиях экспедиционной работы (Н. В. Плоскирев).

Стабильная сухая Л. с. выпускается промышленностью, инструкция по ее изготовлению и применению рассылается вместе со средой. Большинство диагностических лабораторий применяет для выделения и дифференцирования патогенных энтеробактерий высококачественные стандартные элективные сухие питательные среды отечественного производства - Л. с., бактоагар Ж, среду Плоскирева (см. Плоскирева среда).

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 110, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 58, М., 1973; Levine М. The effect of concentration of dyes on differentiation of enteric bacteria on eosin- methylene- blue agar, J. Bact., v. 45, p. 471, 1943.

Г. П. Беликов.